Abstrakt

Autoimmunität 2017: Bewertung eines kostengünstigen, weniger empfindlichen Enzymimmunassays zur Schätzung der frühen HIV-Seroinzidenz - Vinay Khanna - Manipal University

 Vinay Khanna und Indira Bairy 

Hintergrund und Ziel: Normalerweise sind molekulare Methoden wie der Nachweis viraler RNA oder proviraler DNA die empfindlichsten Methoden zur Frühdiagnose von HIV Typ 1. Diese Methoden erfordern komplexe und teure Technologien und sind daher in ressourcenarmen Gegenden der Entwicklungsländer weitgehend nicht verfügbar. In dieser Studie haben wir versucht, einen neuen, weniger empfindlichen HIV1-Immunoassay unter Verwendung der Aviditätsmethode in Verbindung mit dem empfindlichen Enzymimmunoassay einzusetzen, um zwischen Personen mit frischer und seit langem bestehender HIV-1-Infektion zu unterscheiden. Methoden: Diese Studie wurde in einem Zentrum der tertiären Versorgung in Südindien durchgeführt. Aufeinanderfolgende Serumproben (n = 261) wurden von HIV-seropositiven Patienten im Alter von über 15 Jahren entnommen. Von allen Teilnehmern wurden eine schriftliche Einverständniserklärung sowie epidemiologische, klinische und Labordaten eingeholt. Alle Fälle einer HIV-1-Infektion wurden mit einem Standard-ELISA getestet und durch einen Western-Blot-Test bestätigt. Diese Proben wurden weiter mit der Aviditätsindexmethode und Affinitätsstudien getestet, um Patienten mit frischer von etablierter HIV-1-Infektion zu unterscheiden. Ein Aviditätsindex ≤ 0,9 wurde als Cut-off-Wert für eine kürzlich aufgetretene HIV-Infektion mit einer HIV-Dauer von weniger als 6 Monaten genommen. Ergebnisse: Von 261 Patienten wiesen 26 einen Aviditätstestwert von kleiner oder gleich 0,9 auf und wurden als kürzlich serokonvertierend eingestuft, da Antikörper seit ≤ 6 Monaten im Serum nachweisbar waren. 235 Patienten mit einem Aviditätswert von > 0,9 wurden als Langzeitfälle eingestuft, da dort Antikörper seit > 6 Monaten zirkulierten. Von 26 Fällen einer kürzlich aufgetretenen Infektion wurde ein Fall mithilfe der Aviditäts-Immunoassay-Methode fälschlicherweise als kürzlich infiziert eingestuft, obwohl die Anamnese auf eine Langzeitinfektion hindeutete. Schlussfolgerungen: Der Aviditätsindex-Immunoassay wurde für einfache Leistungsmerkmale entwickelt, ist kostengünstig, zeitsparend und erfordert keine anspruchsvollen Laboranforderungen. Diese Technik kann auch vor Ort durchgeführt werden, um kürzlich aufgetretene Infektionen festzustellen, obwohl die Möglichkeit einer Fehlklassifizierung bei Personen mit einer lange bestehenden Infektion besteht. Die Identifizierung neuer Infektionen auf der Grundlage einer Kombination anderer Methoden erfordert weitere Forschung, um Fehlklassifizierungen zu vermeiden und die tatsächliche HIV-Inzidenz so früh wie möglich zu ermitteln. Ein Immunassay ist ein biochemischer Test, der die Präsenz oder Anordnung eines Makromoleküls oder eines kleinen Moleküls in einer Lösung mit einem Antigen (in der Regel) oder einem Antigen (in der Regel) misst. Das durch den Immunassay identifizierte Molekül wird häufig als „Analyt“ bezeichnet und ist in der Regel ein Protein, obwohl es sich auch um verschiedene Arten von Molekülen unterschiedlicher Größe und Art handeln kann, solange die richtigen Antikörper mit den für die Messung geeigneten Eigenschaften hergestellt werden. Analyten in organischen Flüssigkeiten wie Serum oder Urin werden häufig mithilfe von Immunassays für klinische und Forschungszwecke gemessen. Immunassays gibt es in verschiedenen Formen und Ausführungen.Immunoassays können auf verschiedene Weise durchgeführt werden, wobei Reagenzien hinzugefügt und ausgewaschen oder an verschiedenen Stellen in der Probe isoliert werden. Mehrstufige Tests werden häufig als Trennimmunoassays oder heterogene Immunoassays bezeichnet. Einige Immunoassays können einfach durch Mischen der Reagenzien und der Probe und Vornehmen einer physikalischen Messung durchgeführt werden. Solche Verfahren werden als homogene Immunoassays oder weniger häufig als nicht-trennende Immunoassays bezeichnet. Bei Immunoassays wird häufig ein Kalibrator verwendet. Kalibratoren sind Lösungen, von denen bekannt ist, dass sie den betreffenden Analyten enthalten, und die Konzentration dieses Analyten ist allgemein bekannt. Durch Vergleichen der Reaktion eines Tests auf eine reale Probe mit der von den Kalibratoren erzeugten Reaktion der Probe ist es möglich, die Signalqualität hinsichtlich der Präsenz oder Gruppierung des Analyten in der Probe zu bestimmen. Immunoassays basieren auf der Fähigkeit eines Immunoassays, ein bestimmtes Makromolekül in einer möglicherweise komplexen Mischung von Makromolekülen zu erkennen und zu binden. In der Immunologie wird das spezifische Makromolekül, das von einem Antigen gebunden wird, als Antigen bezeichnet und der Bereich auf einem Antigen, an den das Antigen bindet, wird als Epitop bezeichnet. Manchmal kann ein Immunassay ein Antigen verwenden, um die Anwesenheit von Antikörpern in einer Lösung festzustellen, die dieses Antigen erkennen. In manchen Immunassays kann der Analyt ein Antigen und kein Antigen sein. Neben der Zuordnung eines Antigens zu seinem Antigen ist das andere Schlüsselelement aller Immunassays eine Methode zur Bereitstellung eines messbaren Signals durch das Antigen. Die meisten, aber nicht alle Immunassays beinhalten die künstliche Verknüpfung von Antikörpern oder Antigenen mit einem sichtbaren Namen. In modernen Immunassays gibt es eine große Anzahl von Markierungen, und sie ermöglichen die Erkennung durch verschiedene Methoden. Viele Markierungen sind sichtbar, weil sie entweder Strahlung abgeben, eine Farbänderung in einer Lösung verursachen, unter Licht fluoreszieren oder zur Lichtemission veranlasst werden können. Immunassays können in verschiedenen Formaten durchgeführt werden. Im Allgemeinen kann ein Immunassay je nach Durchführung in eine von mehreren Kategorien eingeteilt werden. Schwere, homogene Immunassays: Bei einem schweren, homogenen Immunassay konkurriert ein unmarkierter Analyt in einer Probe mit einem benannten Analyten um die Bindung eines Immunisators. Die Menge des benannten, ungebundenen Analyten wird dann gemessen. Im Prinzip gilt: Je mehr Analyt in der Probe ist, desto mehr benannter Analyt wird isoliert und anschließend gemessen; daher ist die Menge des markierten, ungebundenen Analyten relativ zur Menge des Analyten in der Probe. Zwei-Stellen-Immunassays ohne Konkurrenz bestehen normalerweise aus einem Analyten, der zwischen zwei Antikörpern „eingeklemmt“ ist. ELISAs werden häufig in diesem Format durchgeführt. Schwere, heterogene Immunassays: Wie bei einem schweren, homogenen ImmunassayDer unmarkierte Analyt in einer Probe konkurriert mit dem markierten Analyten um die Bindung eines Gegenmittels. Bei den heterogenen Tests wird der markierte, ungebundene Analyt isoliert oder weggespült und der verbleibende markierte, gebundene Analyt gemessen. Einseitige, nicht-kompetitive Immunassays: Der unmarkierte Analyt in der Probe bindet an markierte Antikörper. Die ungebundenen, markierten Antikörper werden weggespült und die gebundenen, markierten Antikörper gemessen. Die Stärke des Signals ist direkt von der Menge des unmarkierten Analyten abhängig.