Abstrakt

Entwicklung und Validierung eines kombinierten Enzymimmunoassays aus getrocknetem Serum und Blutflecken zur Analyse von Antikörpern gegen citrullinierte Proteine: Eine neue Biomarker-Plattform für rheumatoide Arthritis

Gary W. Caldwell, Wensheng Lang, Sarah Lamberth, Mark Rigby, Yong-Qing Lin

Ziel der vorliegenden Studie war es, die Methoden der getrockneten Serumflecken (DSS) und getrockneten Blutflecken (DBS) mit der Erkennung durch einen Enzymimmunoassay (ELISA) zu kombinieren, um Antikörper gegen citrullinierte Peptide und Proteine ??(ACPA) bei Patienten mit rheumatoider Arthritis (RA) zu bestimmen. Zwei neue analytische DSS-ELISA-ACPA- und DBS-ELISA-ACPA-Protokolle wurden entwickelt und durch Vergleich mit einem etablierten Serum-ELISA-ACPA-Protokoll validiert. Es wurden Serumproben von RA-Patienten (n = 24) und gesunden Erwachsenen (n = 5) getestet. Die Testleistung in allen drei Protokollen war im ACPA-Konzentrationsbereich von 20 bis 1000 U/ml vergleichbar. Die Intra-Assay- und Inter-Assay-Präzision (%CV) der Rohdaten zur optischen Dichte (OD) lag bei 0,8–4,5 % und 13,7–27,3 % für die ELISA-ACPA-Plattform (ein Zeitraum von 10 Monaten), bei 5,6–15,3 % und 31,0–61,7 % für die DSS-ELISA-ACPA-Plattform (ein Zeitraum von 10 Monaten) und bei 7,0–21,2 % und 24,3–39,3 % für die DBS-ELISA-ACPA-Plattform (ein Zeitraum von 2 Monaten). Die Rohdaten zur optischen Dichte (OD) wurden mithilfe einer symmetrischen sigmoidalen Vier-Parameter-Logistik-Kurventechnik (4PL) angepasst. Die Interassay-Präzision (%CV) und Genauigkeit (%Wiederfindung) der Kalibrierungsstandards lagen zwischen 0,2–12,5 % und 85–113 % für die ELISA-ACPA-Plattform, zwischen 1–32 % und 77–106 % für die DSS-ELISA-ACPA-Plattform und zwischen 1–19 % und 95–105 % für die DBS-ELISA-ACPA-Plattform. Die Korrelation zwischen der ELISA-ACPA- und der DSS-ELISA-ACPA-Plattform für 24 RA- und 5 gesunde Kontrollserumproben war hoch (r=0,9873, p<0,0001). Die neuen DSS/DBS-ELISA-ACPA-Plattformen könnten ein genauer und kostengünstiger Ansatz zur Beurteilung der Prävalenz und Früherkennung von RA in groß angelegten Bevölkerungsstudien sein.