Abstrakt

Entwicklung einer analytischen Methode zur Plasmabestimmung von fünf Antiepileptika und ihren Metaboliten mittels HPLC: Vergleich mit immunanalytischen Methoden

Kaouthar Louati, Sarah Mahfoudhi und Fathi Safta

Da sich die Bioanalyse als entscheidendes Instrument im Prozess der Arzneimittelentdeckung und -entwicklung herausgestellt hat und die Verfügbarkeit kostengünstigerer, schnellerer und einfacherer Analysemethoden wünschenswert ist, um Screeningstudien zu Arzneimittelwechselwirkungen mit statistischer Validierung über einen weiten Konzentrationsbereich zu unterstützen, besteht das Ziel dieser Arbeit darin, eine einfache, schnelle und kostengünstige Hochleistungsflüssigkeitschromatographiemethode zur gleichzeitigen Quantifizierung der menschlichen Plasmakonzentration von sechs in der klinischen Praxis häufig verwendeten Antiepileptika (Phenobarbital, Lamotrigin, Oxcarbazepin, Monohydroxycarbazepin, Carbamazepin und Phenytoin) zu entwickeln. Clonazepam wurde als innerer Standard verwendet. Die Probenvorbereitung bestand aus einem Deproteinisierungsschritt mit Acetonitril. Nach der Extraktion wurden die Analyten auf einer auf 25 °C temperierten C18-Umkehrphasensäule getrennt. Die mobile Phase bestand aus 50 % Phosphatpuffer (pH = 7,5) und 50 % Methanol/Acetonitril (80:20, v/v), isokratisch gepumpt mit 1 ml/min. Der UV-Detektor war auf 215 nm eingestellt. Die Gesamtlaufzeit betrug nur 10 Minuten. Die Extraktionsausbeute lag zwischen 84 % und 99 %. Alle diese Antiepileptika wurden mit guten Peakformen und einem Auflösungsfaktor von über 2 getrennt. Die neue Methode erwies sich als einfach und schnell. Die Kalibrierungskurven waren linear mit Regressionskoeffizienten von über 0,998. Die Intra- und Interday-Präzision CV% variierte zwischen 0,91 % und 5,69 %. Der Bias-Wert für die Genauigkeit lag zwischen 2,42 % und 1,27 %. Die mittleren absoluten Extraktionsrückgewinnungen bei niedrigen, mittleren und hohen Qualitätskontrollprobenniveaus lagen zwischen 84,17 % und 99,02 %. Diese bioanalytische Methode wurde erfolgreich an echten Plasmaproben von 26 Epilepsiepatienten angewendet. Unsere Ergebnisse wurden mit denen verglichen, die durch Immunassay-Methoden im biochemisch-toxikologischen Labor des FATTOUMA-Krankenhauses und im tunesischen Pharmakovigilanzzentrum erzielt wurden. Die entwickelte Methode scheint ein geeignetes Instrument für die routinemäßige therapeutische Arzneimittelüberwachung und auch zur Unterstützung anderer klinischer pharmakokinetischer Studien zu sein.