Abstrakt

Identifizierung und Quantifizierung von Tilletia caries und T. controversa in Saatgutproben und Unterscheidung der beiden Arten

Zgraja G, Kramer S, Jonitz A und Wagner W

Der durch Tilletia caries verursachte Stinkbrand und der durch T. controversa Kühn verursachte Weizen-Zwergbrand sind wichtige samenübertragene Krankheiten bei Getreide und Grünlandarten (Graminaceae). Der Kontaminationsgrad wird routinemäßig von Zertifizierungsstellen oder offiziellen Kontrolllabors kontrolliert. Wir berichten über mehrere PCR-Tests, die zur Identifizierung und Quantifizierung von Tilletia spp. in kontaminierten Weizen- und Dinkelproben entwickelt wurden. Ein 140 bp langes Segment der ITS-Region wird mit qualitativer PCR für Screeningzwecke oder mit Echtzeit-PCR zur Quantifizierung amplifiziert. Die Methode wurde sowohl intern als auch in einem Leistungstest im Vergleich mit anderen etablierten Methoden erfolgreich validiert. Darüber hinaus wurde eine PCR-RFLP zur Artenunterscheidung entwickelt. Unter Verwendung von HinfI als Restriktionsendonuklease wird die PRB2-Sequenz von T. caries in drei Fragmente verdaut, während es bei T. controversa nur zwei sind. Bei Routineanalysen und der Überwachung von Saatgutpartien oder Futtermitteln ist dieser PCR-Ansatz eine geeignete Alternative zu den zeitaufwändigen und mühsamen traditionellen mikroskopischen Methoden.