Abstrakt

Reinigung und Charakterisierung von β-1,3-Glucanase aus Candida Oleophila zur biologischen Kontrolle von Penicillium expansum

Carlos Tamayo-Urbina, Victor Guerrero-Prieto, Cesar Guigon-Lopez, Francisco Vargas-Albores, David Berlanga-Reyes, Carlos Acosta-Muniz5 und Damaris Ojeda-Barrios

Candida oleophila wurde ursprünglich aus Apfelschalen in der Region Cuauhtémoc, Chihuahua, Mexiko isoliert und nutzt die Produktion von Exo-β-1,3-Glucanase als Wirkungsmechanismus gegen Penicillium expansum in Äpfeln nach der Ernte. Die von C. oleophila erzeugte β-1,3-Glucanase-Aktivität auf einem Medium mit minimaler Salzkonzentration unter Verwendung von Glucose, Laminarin oder Zellwandfragmenten von P. expansum als einziger Kohlenstoffquelle wurde bestimmt. Die höchste β-1,3-Glucanase-Aktivität (249 U/l) wurde nach 48-stündiger Inkubation unter Verwendung von nur Glucose erzielt. β-1,3-Glucanase wurde mittels Anionenaustauschchromatographie auf DEAE-Sepharose aus einem Wachstumsmedium gereinigt, wodurch die spezifische Aktivität der β-1,3-Glucanase im Vergleich zum Rohextrakt nach Ultrafiltration um das 74-fache erhöht wurde. SDS-PAGE zeigte eine gereinigte β-1,3-Glucanase mit einem geschätzten Molekulargewicht von 48,3 kDa. Das gereinigte Enzym hydrolysierte Laminarin zu Glucose als Endprodukt und wurde auf nativen Polyacrylamidgelen als monomeres Protein identifiziert. Die optimale Aktivität trat bei pH 5 und 40 °C auf, und das Enzym war bei 30 °C 1 Stunde lang stabil. Die gereinigte Exo-β-1,3-Glucanase reduzierte bei Kontakt mit P. expansum-Konidien die Konidienkeimung auf 51,8 % und das Myzelwachstum auf 31 %. Die Ergebnisse zeigen, dass eine Wirkungsweise von C. oleophila zur Kontrolle von P. expansum die Produktion von β-1,3-Glucanase ist und dass die gereinigte