Abstrakt

Eine neuartige Reverse-Transkriptase-Echtzeit-PCR-Methode zur Quantifizierung lebensfähiger Vibrio Parahemolyticus in rohen Garnelen basierend auf einer Methode zur schnellen Konstruktion einer Standardkurve

Mengtong Jin, Haiquan Liu, Wenshuo Sun, Qin Li, Zhaohuan Zhang, Jibing Li, Yingjie Pan, Yong Zhao

Vibrio parahemolyticus ist ein wichtiger Krankheitserreger, der zu lebensmittelbedingten Erkrankungen durch Meeresfrüchte führt. Daher werden schnelle und zuverlässige Methoden zum Nachweis und zur Quantifizierung aller lebensfähigen V. parahaemolyticus in Meeresfrüchten benötigt. In diesem Test wurde eine RNA-basierte Echtzeit-Reverse-Transkriptase-PCR (RT-qPCR) ohne Anreicherungsschritt zum Nachweis und zur Quantifizierung aller lebensfähigen V. parahaemolyticus in Garnelen entwickelt. RNA-Standards mit den Zielsegmenten wurden in vitro mit T7-RNA-Polymerase synthetisiert und anschließend in cDNA umgewandelt, um die Standardkurve zur Quantifizierung von V. parahaemolyticus zu erstellen. Die Reaktionseffizienz betrug 94,56 % und lag im akzeptablen Bereich. Ohne Voranreicherung betrug die Sensitivität der RT-qPCR zur Quantifizierung von V. parahaemolyticus in Garnelen ungefähr 58 KBE/g. Darüber hinaus wurde das Überleben von V. parahaemolyticus in versetzten Garnelenproben mittels RT-qPCR, DNA-basierter qPCR und Standard-Plattenzählmethode quantifiziert. Die Quantifizierungsergebnisse von RT-qPCR zeigten im Vergleich zur Standard-Plattenzählmethode eine gute statistische Korrelation (R2 = 0,96). Der Korrelationskoeffizient zwischen Plattenzählmethode und DNA-basierter qPCR betrug jedoch nur 0,85 für die Quantifizierung von V. parahaemolyticus. Basierend auf den Ergebnissen könnte diese neue Methode eine effektive Möglichkeit sein, zuverlässige quantitative Daten über lebensfähige V. parahaemolyticus in Garnelen zu liefern.