Abstrakt

Klonierung und Expressionsanalyse von Vv-lac3, einem neuen funktionellen Laccase-Gen, das an der Stielverlängerung beteiligt ist, basierend auf der Genomsequenz von Volvariella volvacea

Yuanping Lu, Guangmei Wu, Lingdan Lian, Lixian Guo, Zhiyun Yang, Wei Wang, Binzhi Chen, Baogui Xie

Pilz-Laccasen spielen immer eine wichtige Rolle in verschiedenen physiologischen und entwicklungsbedingten Prozessen. Hier haben wir ein Laccase-Gen geklont und Vv-lac3 genannt, cDNA aus Volvariella volvacea, und die cDNA in Pichia pastoris exprimiert. Die Vv-lac3-cDNA bestand aus 1599 bp und enthielt einen offenen Leserahmen (ORF), der 532 Aminosäuren kodierte. Die Analyse der abgeleiteten Aminosäuren ergab, dass Vv-lac3 ein 19 Aminosäuren langes Signalpeptid am N-terminalen Ende und ein reifes Protein mit 513 Aminosäuren besaß. Vv-lac3 enthielt vier konservierte Kupferbindungsstellen, was die typische Struktur von Pilz-Laccasen ist. Die phylogenetische Analyse zeigte, dass Vv-lac3 einen hohen Grad an Identität mit anderen Basidiomyceten-Laccasen aufwies. Native-PAGE- und SDS-PAGE-Analysen zeigten, dass das Produkt der Vvlac3-cDNA von P. pastoris eine funktionelle Laccase mit einer Molekülmasse von 65 kDa war. Die Expression des Vv-lac3-Gens in V. volvacea nahm vom Knopfstadium bis zum Verlängerungsstadium zu; sie erreichte im Verlängerungsstadium ihren Höhepunkt und nahm dann im Reifestadium ab, was darauf hindeutet, dass dieses Gen eine regulatorische Rolle bei der Stielverlängerung in V. volvacea spielt.