Abstrakt

Expression des Hauptkapsidproteins des Cainin-Parvovirus durch Hefe (Pichia pastoris) und effiziente Reinigung mittels Arginin in der Affinitätschromatographie

Ying He, Qiumei Shi, Sumin Pan, Cairan Yang, Yanying Zhang und Xinhua Shao

Zur schnellen Erkennung des Hundeparvovirus wurde ein immunchromatographischer (IC) Test entwickelt, der monoklonale Antikörper (McAbs) gegen das Hundeparvovirus (CPV-2) verwendet. Zur Herstellung der McAbs wurde das Gen, das das VP2-Protein von CPV-2a kodiert, in einem Pichia pastoris-Expressionsvektor pPICZ-A exprimiert. Das rekombinante VP2 hatte eine ähnliche Antigenfunktion wie das native Kapsidprotein, wie durch Western Blotting unter Verwendung von polyklonalem CPV-2-Antiserum gezeigt wurde. McAbs gegen CPV-2 wurden durch Fusion der Myelomzelllinie SP2/0 mit Milzzellen von Balb/C-Mäusen hergestellt, die mit gereinigtem rekombinantem VP2-Protein immunisiert wurden. Durch ELISA wurde gezeigt, dass die McAbs spezifisch VP2-Epitope von CPV-2 erkannten, nicht jedoch die anderer Hundeviren wie Staupevirus (CDV) oder Hundeadenovirus (CAV). Ein mit McAbs entwickelter IC-Test war für die schnelle Erkennung des Hundeparvovirus geeignet. Stuhlproben (120) von Hunden mit Verdacht auf CPV-2-Infektion wurden sowohl mit dem Hämagglutination-Test (HA-Test) als auch mit dem IC-Test analysiert, und 52 bzw. 53 Proben erwiesen sich als positiv für CPV-2. Ein Vergleich zwischen den beiden verschiedenen Tests ergab, dass der IC-Test genauso empfindlich ist wie der HA-Test; die Empfindlichkeit und Spezifität des IC-Tests beträgt 98,6 % bzw. 98,1 %.