Abstrakt

Hocheffiziente und stabile Konstruktion eines RNA-Interferenzvektors für Penicillium sp.

Haizhao Xue, Yibo Hu, Xiaoran Fang, Guangshan Yao, Xin Song

RNA-Interferenz (RNAi), die die Genexpression wirksam und gezielt unterdrücken kann, hat großes Potenzial in der Genfunktionsforschung und Genmodifikation gezeigt. In dieser Studie wurde ein RNA-Interferenzvektor pHX-RNAi konstruiert, der eine Hygromycin-Resistenzkassette und eine Transkriptionseinheit für die Haarnadel- RNA-Expression enthält . Ein Gen amy15A, das die Hauptamylase in einem stark Cellulase produzierenden Stamm Penicillium oxalicum A11 kodiert, wurde gezielt herunterreguliert. Die Ergebnisse von SDS-PAGE und RT-qPCR zeigten, dass sowohl die Transkriptions- als auch die Sekretionswerte von Amy15A dramatisch herunterreguliert waren, was darauf hindeutet, dass RNAi eine bedeutende Rolle bei der posttranskriptionellen Regulierung der Genexpression spielt. Alle Hygromycin-resistenten Transformanten mit den Silencing-Konstrukten zeigten ein hohes Maß an Silencing in der Expression von amy15A. In Anbetracht der Konservativität des RNAi-Mechanismus bei Pilzen könnte der in dieser Studie entwickelte RNAi-Vektor pHX-RNAi auch auf andere filamentöse Pilze angewendet werden.